Alumnos: hasta el 23 de noviembre recibo trabajos adeudados, para la evaluación de este período. A los que entreguen en forma posterior, sepan que los trabajos se seguirán recibiendo, en el correo electrónico, pero para otro período de cierre evaluativo.
Saludos.
La profe
FUNDAMENTO
Por la
estructura peptídica y la presencia de determinados grupos (grupos R), las
proteínas pueden reaccionar con una variedad de agentes originándose productos
coloreados. Estas reacciones son la base para la determinación cuantitativa y
cualitativa de las proteínas.
Por
presentarse variaciones en la composición de los aminoácidos de las diferentes
proteínas, se manifiestan diferentes colores y grados de intensidad para una
misma reacción, íntimamente relacionado con la naturaleza de la proteína
analizada.
1) Prueba de la
ninhidrina (Hidrato de tricetohidrindeno).
Todas
aquellas sustancias que presentan al menos un grupo amino y uno carboxilo
libre, reaccionaran con la ninhidrina. La positividad se manifiesta por la
aparición de un color violáceo o amarillo.
Debido
a que las proteínas y los aminoácidos, poseen esta característica, la reacción
sirve para identificarlos.
Algunas
soluciones de amonio y aminas, dan la coloración característica, aparentemente
debido a una oxidación y reducción intramolecular de la ninhidrina en presencia
de amoníaco.
Los
aminoácidos prolina e hidroxiprolina, que no poseen grupo amino sino imino
(-NH-), dan un color rojo que pasa rápidamente a amarillo. La reacción es:
Según vídeo: ¿Qué AA y proteínas dan positivo Ninhidrina y por qué? ¿Cómo se manifiesta el +? ¿Y el negativo?
Anota
2) Prueba de
Biuret
Es una prueba general para polipéptidos y proteínas ya
que sirve para reconocer las uniones peptidicas.
La positividad se manifiesta por la aparición de una
coloración violeta, debida a la formación de un complejo de coordinación entre
los cationes cúpricos en medio alcalino con las uniones peptídicas.
Según vídeo: ¿Qué AA y/o proteínas dan positivo Biuret y por qué? ¿Cómo se manifiesta el +? ¿Y el negativo?
3) Prueba de coagulación:
Es una prueba para identificar: albúminas, globulinas,
gluteninas y prolaminas.
La positividad se manifiesta por la formación de un
coágulo. No se conoce exactamente el mecanismo de reacción, se cree que ocurre
cierta deshidratación de la molécula proteica.
Busca en esta página web: ¿Qué reactivos se pueden usar y cómo se manifiesta el positivo? ¿Y el negativo?
Anota
4) Prueba de Sulfato de amonio:
Las proteínas, como otros coloides son precipitadas por
soluciones concentradas de sales de amonio, como, por ejemplo, [NaCl. (NH4)2SO4 y
NaSO4 ].
Aparentemente la precipitación se debe a la neutralización y deshidratación de
la molécula, seguida de agregación y precipitación.
Busca en esta página web: ¿ Cómo se manifiesta el positivo? ¿Y el negativo?
Anota
5) Prueba xantoproteica:
Es una reacción que reconoce los aminoácidos que poseen
el grupo bencenico (tirosina, fenilalanina, triptófano). Las proteínas que
tienen en su composición estos aminoácidos también darán la reacción. La
positividad se reconoce por la aparición de un color amarillo o verde debido a
la formación de nitrocompuestos.
Según vídeo: ¿Qué AA y/o proteínas dan positivo la prueba Xantoproteica y por qué? ¿Y el negativo? ¿Cómo se manifiesta el +?
6) Prueba de los grupos SH:
Es una prueba para identificar aminoácidos azufrados y
las proteínas que los contienen. Se reconocen por la formación de una
coloración negra o gris. La figura siguiente muestra dicha reacción.
Según vídeo: ¿Qué AA y/o proteínas dan positivo esta reacción y por qué?¿Y el negativo? ¿Cómo se manifiesta el +?
7) Prueba de Sakaguchi:
Es una prueba para identificar arginina y se usa para
identificar proteínas ya que casi todas las proteínas poseen ese aminoácido. El
desarrollo de un color rojo marca la reacción positiva y se debe a la presencia
del grupo guanidina, que caracteriza la arginina
Según vídeo: ¿Qué AA y/o proteínas dan positivo esta reacción y por qué?¿Y el negativo? ¿Cómo se manifiesta el +?
8) Prueba de
Hopkins-Cole:
Es para identificar el triptófano y las proteínas que lo contienen.
La positividad se reconoce por la aparición de un anillo color
violeta-rojizo. La reacción es la siguiente
Según vídeo: ¿Qué AA y/o proteínas dan positivo esta reacción y por qué? ¿Y el negativo?¿Cómo se manifiesta el +?
9) Prueba de
Millon
La reacción es debida a la presencia del grupo
hidroxifenílico (-C6H4OH) en la molécula proteica. Cualquier
compuesto fenólico no sustituido en la posición 3,5, como la tirosina, fenol y
timol, dan positiva la reacción. El
mecanismo de la reacción es poco conocido, posiblemente se deba a la formación
del complejo oxido de mercurio y fenol.
2. A continuación se detalla cómo hubiésemos trabajado en el Laboratorio de la escuela, usando ciertas muestras particulares. Esta parte, se incorpora al TP para que se puedan identificar fundamentalmente los REACTIVOS de las experiencias.
MATERIALES
a.- Materiales
-
Solución de albúmina
-
Solución de gelatina
-
Gelatina hidrolizada
- Tubos de ensayo
- Mechero
- Pinzas de madera
- Soluciones de los reactivos preparados como se indica
b.- Preparación
de una solución de albúmina
Se prepara una solución de albúmina batiendo la clara de un
huevo unos instantes y agregándole después cinco veces su volumen en agua. La
mezcla se filtra a través de una estopilla, recogiendo el líquido filtrado para
realizar las pruebas.
c.- Preparación de la
solución de gelatina
Se utiliza gelatina sin sabor y se hidrata con agua destilada
fría y si es necesario se agrega agua caliente hasta que la solución se vuelva
translúcida.
3.
PROCEDIMIENTO
|
ENSAYO |
PROCEDIMIENTO |
|
1) NINHIDRINA al 1% |
1 ml de sustancia problema + 1 ml del reactivo Calentar a ebullición por 1 min. Dejar enfriar y observar |
|
2) BIURET |
1 ml de sustancia problema + 1ml de NaOH al 10% + solución al
0,5% de CuSO4 agregada gota a gota, con agitación, hasta aparición
de un color violeta, azul o amarillo. El color violeta indica ensayo positivo |
|
3)
COAGULACIÓN |
2 ml de sustancia problema + 4 gotas de
ácido acético al 30% + 1 ml de solución saturada de NaCl Mezclar bien y calentar por 1 min La aparición de un enturbiamiento indica ensayo positivo |
|
4) REACCIÓN CON SULFATO DE AMONIO |
1 ml de sustancia problema + 1 ml de
solución al 50% de sulfato de amonio. Mezclar bien y dejar reposar. Luego
centrifugar. La aparición de un ppdo indica ensayo positivo |
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5) REACCIÓN XANTOPROTEICA |
1 ml de sustancia problema + 0,5 ml de ácido
nítrico concentrado Mezclar, calentar y observar. |
|
6) REACCIÓN DEL GRUPO SH |
1 ml de sustancia problema + 1 ml de NaOH al
40% + 1 ml de acetato plumboso. Mezclar bien y calentar. Observar |
|
7) REACCIÓN DE SAKAGUCHI |
2 ml de sustancia problema + 5 gotas de NaOH
al 40% + 8 gotas de naftol alcohólico + 10 gotas de NaClO al 2%. Mezclar bien y observar |
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8) HOPKINS-COLE |
1 ml de sustancia problema + 3 ml de
reactivo de Hopkins-Cole + 1 ml de H2SO4 conc.,
deslizado por las paredes del tubo. Observar |
|
9) REACCIÓN DE MILLON |
2 ml de sustancia problema + 4 gotas de
reactivo de Millon. Observar |
a) Realiza un cuadro donde incluyas:
cada uno de los test trabajados en este práctico,
cuáles son los reactivos
qué sustancias reconoce
cómo se manifiesta el + POSITIVO.
Antes de encarar este TP deberás repasar estos conceptos:
a) ¿Qué es un triglicérido?
b) ¿Qué es un ácido graso?
c) ¿Cuál es la reacción de saponificación?
Materiales:
Fenolftaleína Hidróxido de sodio 0,05% Hidróxido de sodio 40%
Etanol
96% Ácido sulfúrico al
20%
Manteca
Aceite vegetal Aceite
mineral
1- Presencia de ácidos grasos libres:
En 2 tubos de ensayo coloque 5 ml de agua destilada. En uno de ellos
agregue 15-20 gotas de aceite vegetal, y 2 gotas de fenolftaleína; en el otro,
solamente 2 gotas de solución de fenolftaleína.
Agregue a cada tubo una gota de solución de NaOH al 0,05%. Agite. Si en
algún tubo no aparece coloración debida al indicador, agregue gota por gota más
NaOH, hasta obtener coloración estable.
Registre sus observaciones. Interprételas.
2- Saponificación de una grasa:
En un tubo de ensayo coloque 0,5-1 g de grasa, y fúndala para que se
recolecte en el fondo del tubo. Agregue una lenteja de NaOH (no lo toque, es
cáustico) y 10 gotas de etanol; marque la altura de etanol en el tubo y
caliente suavemente a ebullición durante algunos minutos (aprox. 10 minutos);
reponga el etanol que pierda por evaporación. Agregue al contenido del tubo,
agua hasta aproximadamente 1/3 del tubo. Agite. Interprete su observación.
3- Liberación de ácidos grasos a partir
de jabón:
A una pequeña cantidad de un jabón, agregue 1 ml de solución al 20% de H2SO4.
Caliente suavemente durante 30 segundos. Deje enfriar en reposo, y observe.
Interprete con una ecuación.
4- Separación de ácidos grasos volátiles
(a partir de manteca):
En un balón Engler pequeño coloque 5 g. de manteca. Agregue 10 ml de
etanol y 10 ml de solución de NaOH al 40%. Caliente suavemente. Con precaución,
durante 10 minutos.
Agregue 20 ml de agua destilada al balón y acidifique con H2SO4 al 20%,
compruebe la acidez con un trocito de papel tornasol (¿De qué color?), y
destile, calentando suavemente. Recolecte el destilado en un vaso de
precipitación que contenga unos ml de agua destilada.
Tome la reacción ácido-base al destilado. Interprete con ecuaciones.
Dibuje el aparato utilizado.
a)
En un tubo de ensayo
coloque 1 ml de aceite vegetal o animal; agregue una lenteja de NaOH y caliente
suavemente durante pocos minutos. Observe. Deje enfriar, y verifique si el
aspecto del sistema cambia.
b)
Repita el ensayo sobre
1 ml de aceite mineral (derivado del petróleo).
c)
Interprete sus
observaciones
d)
Sobre un papel de
filtro deje caer en un extremo aceite mineral y en el otro extremo un aceite
vegetal. Flamee el papel de filtro sobre una tela metálica (cuidando de no
excederse en el calentamiento). Registre sus observaciones. Interprételas.
Vegetal (izq) mineral(derecha) _Reactividad frente al hidróxido de sodio
Para los Alumnos de 6°, en la asignatura Lab. de Química Orgánica y Biológica, que adeudan la entrega de trabajos prácticos, se les inform...
